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小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法
更新更新時(shí)間：2025-02-27 瀏覽次數(shù)：388
小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞構(gòu)成半選擇性屏障，該屏障對(duì)于肺氣體交換，調(diào)節(jié)液體和可溶物在血液與肺間質(zhì)之間的流動(dòng)具有重要意義。它還具有代謝功能，可以執(zhí)行一定的非呼吸功能。在肺損傷中，肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞是活性氧類(lèi)的重要靶細(xì)胞之一。
在肺炎的發(fā)生過(guò)程中，神經(jīng)體液介質(zhì)和氧化劑作用于內(nèi)皮細(xì)胞，使得細(xì)胞間隙滲透性增加，蛋白質(zhì)由血液進(jìn)入間質(zhì)。細(xì)胞間隙滲透性的增加導(dǎo)致低氧血癥，出現(xiàn)成人呼吸窘迫綜合征和非心源性肺水腫。
小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常肺組織，細(xì)胞為上皮樣，多角形細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)，采用CD31免疫熒光染色鑒定為陽(yáng)性，細(xì)胞純度高于90%，不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
1.試驗(yàn)所需儀器設(shè)備及試劑
（1）儀器
儀器名稱(chēng) | 規(guī)格型號(hào) |
生物安全柜 | BSC-1500ⅡA2-X |
CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱 | BC-J160S |
熒光倒置顯微鏡 | DS-Ri2 |
高速冷凍離心機(jī) | Multifuge X1R |
電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 | DHG-9123A |
電熱恒溫震蕩水槽 | DK-2B |
（2）試劑耗材
試劑名稱(chēng) | 規(guī)格/貨號(hào) |
T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | 430639 |
血球計(jì)數(shù)板 | Neubauer improved |
24孔板專(zhuān)用細(xì)胞爬片 | YA0350 |
細(xì)胞培養(yǎng)孔板 | WHB-24 |
胎牛血清 | 1414426 |
內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 | Primed-icell-002 |
0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA） | 1734858 |
2、小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞的分離培養(yǎng)
1) 將5-10d的乳鼠浸泡入75%乙醇中，移入生物安全柜，
2) 從胸部解剖乳鼠，取出雙肺置于預(yù)冷的PBS中，盡可能的除去結(jié)締組織等，
3) 取肺邊緣部分，剪碎，將組織塊移入T25培養(yǎng)瓶中，倒置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中，
4) 2h后，培養(yǎng)瓶中注入2 mL內(nèi)皮培養(yǎng)基，小心將培養(yǎng)瓶正置于培養(yǎng)箱，確保組織塊不會(huì)飄起來(lái)，
5) 每3d換液2mL，待細(xì)胞從組織塊中爬出來(lái)后，隔2d換液，待細(xì)胞融合達(dá)到60-70%左右時(shí)，去除組織塊，將肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞重新鋪瓶。